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Chromas 是一款非常專業(yè)的dnf序列分析軟件,通過它可以打開ab1、scf、ztr格式的圖譜文件,通過Chromas可以對(duì)這些圖譜進(jìn)行有效的分析,軟件支持自動(dòng)刪除低質(zhì)量序列和矢量序列,同時(shí)軟件還支持將圖譜進(jìn)行格式轉(zhuǎn)換,從而方便使用其它軟件打開。
1、從Applied Biosystems DNA測序儀打開.ab1色譜圖文件。
2、打開由其他序列發(fā)生器創(chuàng)建或從數(shù)據(jù)庫檢索的SCF和ZTR格式色譜圖文件。
3、保存為.scf或Applied Biosystems .ab1格式。
4、打印色譜圖,其中包含縮放或適合一頁的選項(xiàng)。
5、自動(dòng)刪除低質(zhì)量序列(當(dāng)質(zhì)量數(shù)據(jù)可用時(shí))或矢量序列。
6、以純文本,F(xiàn)ASTA,F(xiàn)ASTQ,EMBL,GenBank或??GCG格式導(dǎo)出序列,或使用基本編號(hào)格式化以進(jìn)行演示。
7、將序列以純文本,F(xiàn)ASTA或FASTQ格式復(fù)制到剪貼板,以粘貼到其他應(yīng)用程序中。
8、反轉(zhuǎn)和補(bǔ)充序列和色譜圖。
9、通過精確匹配或最佳對(duì)齊搜索子序列。
10、顯示3幀中的翻譯以及序列。
11、復(fù)制色譜圖部分的圖像以粘貼到文檔或演示文稿中。
12、批處理,包括格式轉(zhuǎn)換,帶矢量刪除的序列導(dǎo)出,批量打印和原始數(shù)據(jù)的批量導(dǎo)出。
13、使用Nucleics Pty Ltd的PeakTrace RP組件增強(qiáng).ab1文件,以提高峰值可讀性并提取更多高質(zhì)量的基礎(chǔ)。
1、選擇File菜單打開一個(gè)序列文件,或者直接通過Open打開。
2、一般測序中一個(gè)反應(yīng)大概能測的長度為800左右,由于熒光染料的干擾和機(jī)器性能,測序結(jié)果在最開始和最后面的時(shí)候有幾十個(gè)堿基不準(zhǔn)確,如下圖中紅框的部分。評(píng)判測序結(jié)果的時(shí)候可以忽略前50個(gè)和后50個(gè)堿基。
3、我們通過工具欄的縮放工具,可以放大或者縮小整個(gè)視圖:
通過上圖可以看出,不同堿基對(duì)應(yīng)不同的顏色。
4、通過工具欄的“Find'工具,可以查找某個(gè)序列:
5、通過“File”菜單欄的Blast Search可以直接連接在線數(shù)據(jù)庫,將序列進(jìn)行Blast,省去了我們打開NCBI等數(shù)據(jù)庫然后復(fù)制序列再比對(duì)的麻煩:
點(diǎn)擊OK之后出現(xiàn)如下界面,然后點(diǎn)擊“View report”即可。
6、Chromas還自帶序列翻譯蛋白質(zhì)功能,點(diǎn)擊“Options->Show Translations->All”顯示三條蛋白質(zhì)翻譯序列。這里之所以顯示三條,是因?yàn)镃hromas不知道你的序列翻譯的起始位點(diǎn),所以如果你的序列是cDNA序列,那么這三條蛋白質(zhì)序列中總有一條是你想要的,這在我們做蛋白質(zhì)點(diǎn)突變的時(shí)候非常有用。當(dāng)然如果你的是啟動(dòng)子等其他序列,這個(gè)功能是多余的。
7、我們可以將序列導(dǎo)出,并且可以設(shè)置導(dǎo)出的間隔、分行、以及是否顯示序號(hào),下面的設(shè)置中代表每60個(gè)堿基一行。
8、當(dāng)然可能會(huì)有同學(xué)想說,如果我想把測序峰圖放在文章中,我該怎么弄?Chromas沒有存儲(chǔ)為圖片的選項(xiàng),這時(shí)可能有同學(xué)就想用截圖了,這里Chromas可以存儲(chǔ)為PDF格式,在“File”里面選擇Print 預(yù)覽,然后選擇PDF即可。
導(dǎo)出來之后就得到PDF格式的峰圖了,這是矢量圖,可以無限放大。然后通過Photoshop做出所需要的圖片。
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